Figura 16


Figura 16.- Generación de mutantes de levadura por interrupción génica. La integración de un fragmento de ADN dentro de un gen, se logra utilizando un plásmido linearizado con una enzima de restricción. Dado que las moléculas lineales son substratos recombinogénicos (que recombinan frecuentemente), éstas se integran preferencialmente dentro de la secuencia cromosómica homóloga a la que se encuentra en los extremos del plásmido linearizado. De esta forma, un plásmido portador del gen URA3 y del gen SGF (Su Gen Favorito) puede integrarse dentro de la copia cromosomal del gen URA3 si linearizamos el vector cortando en el sitio B, o bien en la copia cromosomal de SGF, si linearizamos el plásmido cortando en el sitio A. En cualquier caso, la integración debe realizarse en una mutante ura3- (marcada *), y las transformantes se seleccionan en placas de medio carente de uracilo.






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